沒(méi)有液氮罐如何凍存細胞

　　沒(méi)有液氮罐如何凍存細胞?不用液氮罐，在冰箱如何凍存4度/-20度/-70度各放多久啊?

　　如果不用液氮罐，可以用-70。我們是這樣做的，將細胞轉移至凍存管中，在-20放置半小時(shí)到一小時(shí)左右，預凍。之后放入-70中，我們嘗試過(guò)載-70中放置1年的細胞沒(méi)有問(wèn)題，復蘇之后狀態(tài)尚佳。至于更長(cháng)時(shí)間我們沒(méi)有嘗試過(guò)，但是老板說(shuō)1年半沒(méi)問(wèn)題，在國外他試過(guò)。

　　細胞凍遵循：慢凍速溶的原則。

　　還可以拿毛巾包著(zhù)凍存管就可以直接放進(jìn)-70，即可以遵循細胞凍慢凍速溶的原則，又比較方便，不用先放-20，因為是慢慢凍進(jìn)去的，所以能更好的達到梯度凍存。

　　實(shí)際上，我認為慢凍速溶原則是正確的。

　　慢凍是要給DMSO以滲透入細胞的時(shí)間，所以我的經(jīng)驗是4度的半小時(shí)要保證，之后就基本上可以馬上凍起來(lái)也沒(méi)有什么關(guān)系了。

　　毛巾包裹法十分新穎，呵呵。不過(guò)，從原理上看，確實(shí)是值得嘗試的好方法，既保證了時(shí)間，又省去了搬來(lái)搬去的麻煩。

　　至于-80度的保存時(shí)間，我親眼所見(jiàn)，半年絕對沒(méi)有問(wèn)題。

　　在4度的情況下，要看你是什么細胞了，如果是老鼠的細胞可以放1小時(shí)左右，其他細胞最多半小時(shí)(本人做過(guò)試驗的);在-20度的情況下，老鼠的可以放1天左右，其他細胞半天，但其狀態(tài)不是很好了;在-70度的情況下，老鼠的細胞可以放1到2年，在此期間要復蘇一次看其生長(cháng)情況，其他細胞最多一年了!

　　1. 選用對數生長(cháng)期細胞，在收集細胞24小時(shí)前換液一次。

　　2. 用常規方法將細胞消化下來(lái)，按(1～5)×106/ml濃度、懸浮于含有10% DMSO的小牛血清或生長(cháng)液中。凍存的細胞數量要充分，因復蘇時(shí)接種的細胞數量應比平常多一些。

　　3. 用吸管吸取細胞懸液，分裝于無(wú)菌安培管中(沒(méi)管1ml)，嚴密封口，放入三層紗布小袋，注明細胞名稱(chēng)和凍存時(shí)間，便于以后查找。

　　4. 凍存 當前已有專(zhuān)用細胞凍存器，能精確地控制凍存溫度。在無(wú)凍存器的情況下，可用手工方法。從把安培懸液在液氮容器口開(kāi)始，在30～40min內，下降到液氮表面，在停30min后，直接投入液氮中?；蛳葘才嘁迫胍旱蘅陬i部氣相中過(guò)夜，次日將紗布袋緩慢下降至液氮中，歷時(shí)3分鐘。在液氮中可長(cháng)期保存。 若沒(méi)有液氮，可存于-80冰箱內，不過(guò)注意保存時(shí)間，比液氮短，可保存3個(gè)月左右。