生物樣本庫儲存腦脊液用于神經(jīng)系統疾病生物標志物分析的研究

　　腦脊液能夠反映神經(jīng)系統疾病的病理生理變化，對于神經(jīng)保護措施以及生物標記物的研究非常必要。因此，腦脊液生物樣本庫與神經(jīng)系統疾病的發(fā)現生物標記物及疾病評估密切相關(guān)。生物樣本庫保存腦脊液的一個(gè)重要方面是質(zhì)控，這對于持續的患者隨訪(fǎng)以及各研究中心之間樣本交換十分必要。通過(guò)系統性地研究以闡明不同前處理和儲存對于腦脊液中大量蛋白的影響是首要和必要的。

　　加強國際網(wǎng)絡(luò )合作以及嚴格使用標準化操作流程是腦脊液樣本庫的重要特點(diǎn)。在本文中提到的也是當前采用的腦脊液及血液樣本的采集和儲存標準流程使得大規模在病例及對照中研究生物標記物成為可能?？傊?，多個(gè)中心間的合作和努力使得神經(jīng)疾病的生物標記物研究已邁入新時(shí)代。生物樣本庫www.guaikua.cn的標準化流程包括樣本收集、質(zhì)量控制以及合理選取生物標記物研究中的對照組，極大地提高了生物標記物研究的質(zhì)量。

　　在各種急性和慢性神經(jīng)系統疾病中，腦脊液能夠反映大腦特殊的病理生理學(xué)過(guò)程，檢測和量化其中的多種分子對疾病的診療起著(zhù)重要作用，有報道表明，對腦脊液中淀粉樣β蛋白、微管相關(guān)總tau蛋白及磷酸化的tau蛋白的檢測能夠區分阿爾茲海默病和非阿爾茲海默病的老年癡呆。本文主要討論了腦脊液保存的特點(diǎn)，包括完善患者電子病歷及與數據庫的連接、二維碼標簽應用的重要性、實(shí)施自動(dòng)化檢索以及前處理因素對腦脊液的影響。

　　本文總結了以下幾點(diǎn)可能對的腦脊液前處理產(chǎn)生影響的因素：

　　1.與患者相關(guān)因素。

　　包括患者在樣本采集當日禁食、吸煙、飲酒、咖啡因攝入量和鍛煉等因素，這些因素可能影響腦脊液中生物標志物的含量;

　　2.實(shí)驗室處理因素。

　　腦脊液和配對血液收集指南

　　標號

　　處理過(guò)程

　　腦脊液

　　血液

　　A收集步驟

　　1、收集和儲存時(shí)間;記錄收集的時(shí)間和日期;同左

　　2、建議采集量：至少12ml，第1-2ml用于常規CSF檢測。后10ml用于儲存，10ml EDTA處理的血漿;10ml血清

　　3、穿刺部位：L3-L5椎間隙，血管

　　4、血液污染：放棄被血細胞污染的CSF

　　血液細胞污染的標準為：500個(gè)/ul。記錄用于診斷樣本中的血細胞數量;無(wú)

　　5、穿刺針型號：無(wú)創(chuàng )傷，標準型號：21-23G

　　6、采集管型號：型號為大于10ml的旋蓋聚乙烯胺采集管，血清：無(wú)凝血激活劑或凝膠，EDTA血漿：無(wú)蛋白酶抑制劑

　　7、其他應同時(shí)收集的體液標本：血清;無(wú)

　　8、其他應同時(shí)收集的體液標本：血漿：EDTA(優(yōu)于檸檬酸)處理;無(wú);B保存前處理

　　9、凍存前保藏溫度;離心及離心前、后均置于室溫中;同左

　　10、離心：2000g(1800-2000)，10min，室溫離心;同左

　　11、修正案草案修改了人口與計：30-60min，最長(cháng)不超過(guò)2h。離心后樣本應該立即分裝凍存，間隔時(shí)間不超過(guò)2h;30-60min，最長(cháng)不超過(guò)2h;用于蛋白組學(xué)研究的樣品離心后1h內處理。血清凝血最少需要30min。

　　12、分裝管型號：修正案草案修改了與全靈2ml分裝用于常規檢測，1ml分裝于樣本庫)并記錄廠(chǎng)家;同左

　　13、分裝份數：最少分裝2管。建議的研究用量為10ml，因此分裝份數大于10份

　　最少

　　14、每管分裝量：每份最少量為0.1ml，具體參照分裝管型號(0.2ml、0，5ml、1ml)，管內儲存量為總體積75%;同左

　　15、編碼：修正法草案規定，具備相應專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員、設施設備、倫理審查機構以及管理制度的醫療;同左

　　16、凍存溫度：-80℃;同左

　　目前，ISBER及生物樣本庫科學(xué)工作小組對當前生物樣本庫質(zhì)控進(jìn)行總結。研究發(fā)現前處理差異可能影響血液中某些酶活性，但這些研究都需要反復論證和實(shí)驗。由于腦脊液中蛋白豐度較低甚至低于常規檢測方法的檢測閾值，這使得很少的方法能夠用于腦脊液生物標記物的檢測。